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VA-044

用于脂質提取的聚合物引發(fā)劑

　　一個世紀以來，生物學家們一直夢想著能夠透過器官甚至整個機體，親眼看到細胞連接和精細結構，現在隨著組織透明化技術的完善，這一夢想終于成為了現實。

◆原理

　　VA-044 作為組織透明化技術中起關鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑，普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在CLARITY 方法中，VA-044 作為引發(fā)劑，催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和PFA 形成水凝膠。

　　2013 年3 月，斯坦福大學的Karl Deisseroth 博士領導的團隊在自然雜志（Nature）上發(fā)表了Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文，文中介紹了制備組織的方法CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中（Hydrogel Monomer Solution）中，經電泳使組織呈現透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結構，使生物分子結合到水凝膠的網孔上。重要的是脂類不會結合到水凝膠上，因而可以通過這種方式將脂類有效去除。通過這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實驗，免疫染色，原位雜交等實驗。

　　CLARITY可用于熒光蛋白質和抗體的免疫染色，可作為解析腦神經回路的有效工具。VA-044是論文實驗步驟中透明化工程的使用試劑。

◆特點• 優(yōu)勢

●　操作簡單，固定蛋白后只需進行電泳；

●　可保持組織、器官和全身結構的完整性；

●　可進行原位雜交和免疫組化實驗，可進行多輪染色和脫色步驟；

◆案例•應用

Clarity 介紹

PARS 介紹

　　2014 年7 月，加州理工學院的研究團隊在細胞雜志（Cell）上發(fā)表論文Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，將CLARITY 技術推進到一個新的高度——全身組織透明化技術，稱為PARS(Perfusion-assisted Agent Release in Situ)。這種技術將透明劑持續(xù)泵入動物的循環(huán)系統(tǒng)從而進入各個組織，或者通過腦脊液管道泵入大腦，再去除脂質，使器官和生物體被高分子滲透而呈現透明，并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細胞結構和三維細胞排列。

圖A. PARS 建立的小鼠透明化腸，并用凝集素（lectin） 亞甲基藍(methylene blue)、DAPI 進行免疫標記后成像  并獲得三種免疫標記的疊加圖（merge）	圖B. PARS 建立的小鼠透明化腎臟并用抗微管蛋白抗體 和DRAQ5 進行免疫標記后成像，并獲得兩種免疫 標記的疊加圖

CLARITY處理的小鼠腦

CLARITY處理的小鼠大腦成像

CLARITY處理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀察
（A）從大腦皮質到海馬的3-D觀察圖像
（B）大腦皮層Ⅴ層的錐體細胞的樹突圖像
拍攝條件：雙光子   使用設備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡

CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像

CLARITY處理后，用Iba1抗體染色Thy1-YFP（H線）小鼠大腦的熒光觀察
（A）在大腦皮質的小膠質細胞的3-D觀察圖像
（B）從表面層觀察皮質Ⅰ層的圖像
拍攝條件：單光子   使用設備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡

◆產品列表